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體外哺乳動物細胞染色體畸變試驗儀

點擊次數(shù):73 更新時間:2025-04-28

體外哺乳動物細胞染色體畸變試驗儀

一、 儀器介紹

實驗目的:

本試驗檢測受試物是否引起培養(yǎng)的哺乳動物細胞染色體畸變,以評價受試物致突變的可能性

實驗概述:

在加入和不加入代謝活化系統(tǒng)的條件下,使培養(yǎng)的哺乳動物細胞暴露于受試物中。用中期分裂相阻斷劑(如秋水仙素或秋水仙胺)處理,使細胞停止在中期分裂相,隨后收獲細胞,制片,染色,分析染色體畸變。

大部分的致突變劑導致染色單體型畸變,偶有染色體型畸變發(fā)生。雖然多倍體的增加可能預示著有染色體數(shù)目畸變的可能,但本方法并不適合用于測定染色體的數(shù)目畸變。

應用范圍

應用于科研、農(nóng)業(yè)、衛(wèi)生、教育、霧霾狀態(tài)可吸入顆粒染毒效果研究等各個領域

符合標準:

GB/T 15670.19-2017《農(nóng)藥登記毒理學試驗方法第19部分:體外哺乳動物細胞染色體

畸變試驗》

二、試驗流程

1)細胞培養(yǎng)

選擇合適細胞系,在含血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)至對數(shù)生長期。

2)受試物處理

設置多個濃度組(需包括細胞毒性評估,如50%生長抑制濃度)

陽性對照

陰性對照(溶劑對照)

3.)代謝活化系統(tǒng)(S9混合液)

模擬體內(nèi)代謝,用于檢測需代謝激活的致突變物(如加Aroclor 1254誘導的大鼠肝S9

4.)采樣時間

短期處理:1個細胞周期(通常24小時,含或不含S9

長期處理:覆蓋多個細胞周期(如48小時)

5)染色體制備

秋水仙素(或秋水仙胺)處理:阻斷中期細胞。

低滲處理(KCI溶液)使細胞膨脹。

固定(甲醇:冰醋酸=3:1)后滴片,Giemsa染色。

6)鏡檢分析

顯微鏡下觀察至少200個中期分裂相,記錄畸變類型和頻率。

 

 

 

三、儀器與試劑

關鍵儀器:

培養(yǎng)箱、生物安全柜、離心機、顯微鏡(配備油鏡和圖像分析系統(tǒng))

染色體自動掃描儀(可選)

主要試劑:

細胞培養(yǎng)基、胎牛血清

秋水仙素、Giemsa染液、S9混合液。

 

 

 

 

 

 

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